استاد کارگاه آموزشی اصول و کاربرد HPLC

فاطمه حسنی‌نژاد – کارشناسی ارشد بیوشیمی دانشگاه شیراز – سه سال سابقه کار با دستگاه

زمان برگزاری کارگاه آموزشی اصول و کاربرد HPLC

پنجشنبه ۱۰ شهریور ۱۴۰۱

کارگاه یک روزه بوده و از ساعت ۸:۳۰ صبح شروع میشود

ظرفیت: ۱۰ نفر

این کارگاه به صورت حضوری و عملی و با رعایت پروتکل های بهداشتی برگزار میشود.

آموزش به صورت کاملاً کاربردی و توسط کارشناسان متخصص تجهیزات مذکور ارائه خواهد شد

در پایان این کارگاه، گواهی معتبر حضور در دوره از طرف آزمایشگاه مرکزی دانشگاه شیراز، به دو صورت فارسی و انگلیسی و به صورت مجزا صادر میگردد.

کروماتوگرافی مایع با کارایی (HPLC)

آلمان Knaver :ساخت کمپانی
AZURA : مدل دستگاه
دارای آشکارساز مرئی – فرابنفش
دارای آشکارساز فلوئورسانس
دارای ستون های فازمعکوس و ژل فیلتراسیون
(Auto Sampler) دارای نمونه بردار خودکار

آنالیز کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
High Performance Liquid Chromatography

یکی از تکنیک های بسیار خوب برای جداسازی، شناسایی و اندازه گیری مقادیر کم مواد است. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا از دو فاز ثابت و متحرک تشکیل شده است. که فاز متحرک مایع است و فاز ثابت جامد می باشد. نمونه ابتدا در یک حلال حل شده و سپس وارد ستون می شود و تحت فشار بالا جریان می یابد. انواع مختلفی از برهم کنش ها و نیروهای مولکولی در فرایند بازداری موثر هستند. با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا، آنالیز کمی و کیفی قابل انجام است. آنالیز کیفی، برای تشخیص و شناسایی نوع ترکیبات انجام میشود. برای تعیین کمی مقدار آنالیت نیز سطح زیر پیک و یا ارتفاع پیک
ترکیب مجهول با نمونه استاندارد مقایسه میشود.

آشکارساز فلورسانس
(Fluorescence, FL)

مزیت عمده این آشکارساز حساسیت و گزینش پذیری بالاست اما ترکیب موردنظر باید که خاصیت جذب فلورسانسی داشته باشد. با استفاده از یک طول موج خاص اتم های آنالیت برانگیخته شده و نشر فلورسانس آنها متناسب با غلظت اتم خواهد بود.

ستون ژلی
(Gel Filtration)

مولکولها برمبنای اندازه موثر و شکل آن در محلول از یکدیگر جدا می شوند. و اگر از حلال های آلی استفاده کنیم این روش اغلب کروماتوگرافی ژل تراوا و اگر از حلالهای آبی استفاده نمائیم آن را کروماتوگرافی ژل صافی می نامند. فاز های ساکن مورد استفاده در کروماتوگرافی طرد ذرات متخلخل با اندازه منافذ کنترل شده می باشند. و نباید بین جزء نمونه و سطح فاز ساکن برهم کنش موجود باشد. حجم کل فاز متحرک درون ستون عبارت است از مجموع حجمی که خارج از ذرات فاز ساکن می باشد. این روش برای جداسازی گونه های یونی مانند آمینواسیدها استفاده میشود.

ستون فاز معکوس
(Reverse Phase-HPLC)

در کروماتوگرافی مایع فاز معکوس، فاز ساکن یک ماده غیرقطبی مثل اکتادسیل سیلان است که به صورت شیمیایی به ذرات پرکننده متصل می شود و فاز متحرک یک حلال نسبتاً قطبی مثل آب، متانول، استونیتریل، تتراهیدروفوران یا مخلوطی از آنهاست. مخلوطی که باید جداسازی شود توسط حلال یا مخلوطی از حلال ها (فاز متحرک) به ستون که با فاز ساکن پر شده منتقل می شود. در شرایط بهینه، اجزایی که باید جداسازی شوند، با سرعت های متفاوت از فاز ساکن عبور کرده و ستون را در زمان های مختلف ترک می کنند. پیک های گونه های خروجی از ستون به کمک آشکارساز مشخص می شوند و خروجی که یک کروماتوگرام است رسم می شود.